L'ingénierie du microenvironnement d'une alcool déshydrogénase thermostable par fusion avec des protéines suralimentées améliore la catalys

maart 13, 2019 0 Door admin

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L’ingénierie du microenvironnement d’une alcool déshydrogénase thermostable par fusion avec des protéines suralimentées améliore la catalyse

Première publication: 11 mars 2019

Abstrait

Le microenvironnement enzymatique peut avoir un impact sur l’activité biocatalytique. Cependant, ces effets peuvent être difficiles à étudier car les mutations et les fusions peuvent introduire de multiples variables et des effets qui se chevauchent. Nous étudions ici les complexes formés entre une alcool déshydrogénase thermostable et des mutants superpliants de protéine fluorescente verte (sfGFP) avec des charges de surface extrêmes. Trois variantes de sfGFP chargées, ‐30, 0 et 36, étaient liées de manière covalente à ADHD via le système SpyCatcher / SpyTag. Les taux spécifiques pour l’oxydation du 2,3-butanediol dépendant de NAD étaient significativement augmentés dans le complexe ‐30 sfGFP, un effet mixte était observé pour les complexes 0 sfGFP et les taux n’étaient pas affectés par la complexation de 36 sfGFP. Les réactions effectuées avec des valeurs de pH (7,8 à 9,8) et des concentrations en sel variables (7,75 à 500 mM) ont montré qu’il existait une interaction complexe entre ces effets, qui était compatible avec des protéines de fusion affectant la force ionique locale par opposition au pH local. Des analyses cinétiques à l’état d’équilibre ont été effectuées avec les complexes ‐30 et 0 ADHD ‐ sfGFP. L’efficacité catalytique globale dépendait de la charge du variant sfGFP fusionné, et les fusions ‐30 sfGFP présentaient les effets bénéfiques les plus importants à pH 8,8. La fusion d’une protéine suralimentée est un moyen facile de modifier le microenvironnement enzymatique. L’impact des fusions sur la force ionique apparente permet de mieux comprendre les effets des patchs chargés observés sur les complexes enzymatiques formant le métabolon.

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